迪士尼彩乐园博彩官网 猪链球菌通用型、2型检测试剂盒（荧光pcr法）

猪链球菌(通用型、2型）检测试剂盒（双色及时荧光PCR法）迪士尼彩乐园博彩官网

【居品称号】

通用称号：猪链球菌(通用型、2型）检测试剂盒（双色及时荧光PCR法）

英文称号：Streptococcus suis and Streptococcus suis serotype 2 Detecting Kit (Dual Channel Real-Time PCR Method)

【包装规格】 25T/盒 ＆ 50T/盒

【预期用途】

本试剂盒诳骗及时荧光PCR旨趣，依据猪链球菌非凡基因及2型猪链球菌非凡基因定性筛查检测猪链球菌，对猪链球菌2型过火他猪链球菌引起的相干病症的会诊及疗效评估有遑急教导意旨。

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【训诫旨趣】

本试剂盒针对猪链球菌（SS）基因及2型猪链球菌（SS2）猜想打算特异性引物和探针，在响应体系中含有猪链球菌DNA模板的情况下，PCR响应得以进行并开释荧光信号。诳骗仪器 对PCR经过中相应通说念的信号强度进行及时监测和输出，完竣检测效果的定性分析。

【主要构成成份】

序号

构成

25T/盒

50T/盒

1

SS、SS2 PCR响应液

437.5μL×1管

875μL×1管

2

SS、SS2羼杂酶液

62.5μL×1管

125μL×1管

3

SS、SS2阳性对照

40μL×1管

40 μL×1管

4

SS、SS2阴性对照

40μL×1管

40 μL×1管

5

证据书

1份

1份

注：阴性对照为不含SS、SS2的其它菌的羼杂物，阳性对照为灭活的SS、SS2。

【储存条目及有用期】避光-20℃以下保存，幸免反复冻融，有用期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通说念及时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1. 如使用原始标本进行检测,标本应为簇新鸠集并使用双蒸灭菌水或灭菌生理盐水悬浮的原始标本。

2. 如需在增菌后进行PCR检测，则应使用遴荐性增菌液对原始标本进行增菌。

3. 标本鸠集后若不可立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需恒久保存，标本应冻存于-20℃～-80℃。

【训诫设施】

1. 试剂准备（试剂准备区）

（1）从雪柜中取出试剂盒, 从试剂盒中取出现实所需试剂，充分熔解混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

（2）核算当次现实所需要的响应数（n），并字据如下表所示响应体系算计当次现实所需要的多样试剂量。

n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+罪恶预留量（1T）+样本数

单反液配制表(每份)

PCR响应液

17.5 μL

羼杂酶液（Taq酶+UNG酶）

2.5 μL

(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR响应管。

(4) 盖紧PCR响应管盖后将PCR响应管至样本惩办区。剩余试剂放回-20℃以下雪柜冷冻保存。

2.样本准备（样本惩办区）

用QIAGEN、Roche公司DNA索要试剂盒索要DNA，具体操作按照其试剂盒证据书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR响应样本管均分手加入惩办好的待测标本DNA各5μl、终体积25μl/管，盖好PCR响应盖混匀后瞬时低速离心，摇荡到PCR仪器上。阴性对照和阳性对护士则各加5μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25μl/管，盖好PCR响应盖混匀后瞬时低速离心，迪士尼彩乐园三代理摇荡到PCR仪器上。

4.PCR（PCR扩增区）

（1）取样本惩办区准备好的PCR响应管，舍弃在及时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并纪录舍弃法则。

（2）按下表设置仪器核酸扩增相干参数进行PCR扩增。

响应体积

25 μL

通说念遴荐

FAM通说念鸠集SS荧光信号

HEX通说念鸠集SS2荧光信号

PCR

响应

条目

设施

条目

轮回数

UNG惩办

50℃：2分钟（min）

1

预变性

95℃：3分钟（min）

1

预扩增

95℃：5秒（s）

5

55℃：40秒（s）

PCR扩增

95℃：5秒（s）

40

55℃：40秒（s）

（此阶段浪漫时鸠集荧光信号）

注：ABI系列荧光PCR仪在设当场不选ROX雠校，设置淬灭基团遴荐None。

【参考值（参考界限）】

1.试剂盒有用性判定：

（1）阳性对照：有典型S型扩增弧线或Ct值≤35。

（2）阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻细斜线，无指数增恒久。

2.标本效果判定：

（1）阳性：标本检测效果Ct值≤35或有判辨指数增恒久。

（2）可疑：标本检测效果Ct值在35～38界限内。此时应答标本进行近似检测，如近似现实效果Ct值仍在35～38界限内，有判辨指数增恒久，则判定为阳性，不然为阴性。

（3）阴性：标本检测效果Ct值＞38或无Ct值。

【训诫效果的证据】

通说念及检测效果

标本检测效果证据

FAM

HEX

阴性（－）

阴性（－）

标本中未检出SS、SS2

阴性（－）

阳性（＋）

标本中检测出SS2，未检出SS

阳性（＋）

阴性（－）

标本中检测出SS，未检出SS2

阳性（＋）

阳性（＋）

标本中检测出SS和SS2

【训诫设施的局限性】

1. 当检测样本中被检核酸浓度含量低于本试剂盒的检出限时可能会发生假阴性的效果。

2. 本试剂盒仅供标本初步筛查使用，关于本试剂盒检测阳性效果应进一步使用培养法进行确诊。

【居品质能谈判】 居品的检出限为102CFU，居品CV值≤5%。

【防护事项】

3. 通盘检测经过应严格按照本证据书要求分手在试剂准备区、样本惩办区和PCR扩增区进行操作，各区现实服、仪器、耗材应寂寞使用，不可混用；现实用吸头遴选带滤芯吸头；样本惩办区应配有生物安全柜，样本惩办在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌安设。

4. 每次现实应该设置阴、阳性对照。

5. 为保证试剂不受标本羞耻，必须将羼杂酶液及PCR响应液保存于试剂准备区。

6. 试剂盒统共试剂在使用前应该在常温下充分熔解混匀，并应瞬时离心。

7. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在di一次使用前应一说念摇荡至标本准备区，并单独存放。

8. 为退守荧光干豫，应幸免裸手径直宣战PCR响应管，并应幸免在PCR响应管上进行任何标志。

9. 仪器扩增相干参数应按照本证据书相干要求进行设置；不同批号试剂不可混用。

10. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX雠校，淬灭基因遴荐None。

11. 现实经过中居品的消逝物应该进行无害化惩办后方可丢弃迪士尼彩乐园博彩官网。